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上海Ni Crystarose FF 镍柱纯化填料
类别：
上海6xHis标签蛋白纯化填料
产品描述
Ni Crystarose FastFlow
镍柱6*His琼脂糖亲和层析填料
6×His Tag purification resin
产品概述
Ni-Crystarose FF是金属螯合亲和层析树脂，又称固定金属离子亲和色谱，其原理是利用蛋白质表面的某些氨基酸（主要是组氨酸），能与多种过度金属离子(如Ni2+)发生特殊的相互作用，利用这个原理可以把富含这类氨基酸的蛋白质吸附，从而达到分离的目的。
Ni-Crystarose Fast Flow是在高度交联琼脂糖上偶联金属螯合基团，此基团是有NTA和TED改变而来，兼具IDA的高载量、NTA的低镍离子泄露、TED的高纯度（纯度可能更高）、耐碱和还原剂的特性（详情见特性表），并预先鳌合Ni2+，到手即可用0.5N-1N的氢氧化钠消毒使用，无需脱镍，性能更稳定，方便耐用。
产品特点
a 刚性强、流速快、载量高。
b 镍离子脱落极低，通常在正常使用寿命内几乎不需要再鳌合镍离子。
c 亲和特异性更强，兼容复杂样品（如比较糟糕的细胞培养液）
d 非特异性吸附更低、几乎无需洗杂步骤，使用寿命更长。
e 特异性更强，纯度更高，载量更高，但洗脱 咪唑浓度可以更低。
f 试剂兼容性广，可兼容还原剂和EDTA。
g无需脱镍直接用氢氧化钠CIP，减少步骤，减少污染，生产放大更容易。
h该填料可以从含有高达5mM EDTA2Na中抓取含有His-tag蛋白，再加上极高的特异性，即使在非常糟糕的细胞培养液中纯化目的蛋白也可以达到无可比拟的纯化效果，且不需要脱镍就可以直接用0.5M的氢氧化钠在线CIP，解决了其他镍亲和填料（金属螯合层析填料）需要脱镍在清洗的弊端，而且使用寿命更长，载量更高。
适用范围
Ni Crystarose系列填料是最新推出的新一代His标签纯化产品，革新了传统的His标签纯化方法。其特点是非特异性更低，纯化蛋白纯度更高，纯化周期更短，可以在线彻底清洗防止污染，可以在含有EDTA和还原剂的溶液中捕获目标蛋白，特别适合真核分泌的His标签蛋白的纯化。
介质技术指标
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技术指标 |
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基质 |
高度交联6%琼脂糖 |
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平均颗粒大小 |
90µm |
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颗粒粒径范围 |
45µm-165µm |
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配基浓度 |
15µmol Ni2+/ml胶 |
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动态载量 |
40mg/ml His蛋白 |
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缓冲溶液 |
所有常规缓冲溶液 |
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化学稳定性 |
所有常用缓冲试剂；0.5M NaOH；0.01M HCl 40℃一周；1M NaOH、70%乙酸放置12h；2%SDS；30%异丙醇1h |
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pH稳定性（较长期） |
3-12 |
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CIP稳定性（短时间） |
2-14 |
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最大压力 |
0.4Mpa |
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最大流速/推荐流速 |
750cm/h/150cm/h |
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储存液 |
20%乙醇 |
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存储温度 |
0-30℃ |
镍柱纯化常见问题解答：
纯化后纯度很低，SDS-PAGE电泳图很多杂带
传统6*His标签本身的特异性不是很高，有文献报道只要有3*his就能和IMAC柱结合，在加上非特异性结合，有杂带是属于常见现象。
Ni-Crystarose对传统配基进行了改进，大大提高了对6*his标签的特异性，实验测试对带有4*his标签的蛋白几乎无吸附，严格的工艺控制，显著降低了填料的非特异性吸附，明显提升了NI柱纯化的纯度。
镍柱使用几次后，无论怎么CIP都无法恢复性能，使用寿命短
镍柱纯化一般都是直接用细菌细胞破碎后的上清或者细胞培养上清，里面含有大量的各种杂质，这些杂质会很顽固的吸附在填料上面，即使进行严格CIP也很难去除。因此会出现两种常见的后果，一是每一次纯化后柱压都会增加，柱压增加一定程度后会导致微球颗粒破碎，从而影响填料的使用寿命。而是封闭配基，导致可用的配基数量减少，导致填料的载量持续降低。
Ni-Crystarose系列填料由于优化后非特异性吸附很低，超高交联使得填料刚性更强，很大程度上降低了以上两点的影响，使得使用寿命大大增加。工业客户反馈，同样使用条件下，使用寿命较进口大品牌多将近一倍。
蛋白结合不牢，总是有很多流穿甚至不吸附（不挂柱）
6*His标签比较小，即使将标签设计在氨基酸的末端（通常是N端），如果蛋白质分子量小，一般都能和镍柱很好的结合。但是如果氨基酸数量持续增加，结合的能力开始下降，往往在超过200个氨基酸之后效果最明显。由于空间位阻或氨基酸折叠导致隐藏或者遮蔽部分标签或者全部标签，导致His结合力减弱或者不结合。
当然不结合还有一个极少的可能性就是蛋白表达的时候标签丢失了。
Ni-Crystarose系列填料延长了配基的长度，可以有效减少空间位阻的影响，如果在配合公司配置的专用buffer增强吸附能力，能解决大多数被隐藏或遮蔽标签的结合问题。
纯化之前步骤太多，容易二次污染
常用的传统镍柱填料，通常需要在脱镍的条件下进行氢氧化钠消毒清洗，然后在螯合镍离子，无形之中增加工作量，同时也增加了二次污染的可能性。
Ni Crystarose系列填料支持0.5-1M氢氧化钠在线星系，实验证明用1M氢氧化钠浸泡72小时后，填料形态完整功能正常使用。对于对内毒素要求较高的产品，1M的氢氧化钠清洗填料的效果更佳。
